Вплив мікоплазменної контамінації на антигенпродукуючу здатність перещеплюваних культур клітин FLK-BLV

Ye. V. Vashchyk; V. V. Kosheliev; P. S. Yurko; O. V. Ladogubets; K. A. Duchenko

doi:10.31890/vttp.2025.11.05

Ye. V. Vashchyk 1Національний науковий центр «Інститут експериментальної та клінічної ветеринарної медицини», м. Харків, Україна https://orcid.org/0000-0002-5980-6290
V. V. Kosheliev Національний науковий центр «Інститут експериментальної та клінічної ветеринарної медицини», м. Харків, Україна https://orcid.org/0009-0004-7193-1512
P. S. Yurko Національний науковий центр «Інститут експериментальної та клінічної ветеринарної медицини», м. Харків, Україна https://orcid.org/0000-0003-4870-1570
O. V. Ladogubets Державний біотехнологічний університет, м. Харків, Україна https://orcid.org/0000-0002-0977-5940
K. A. Duchenko Державний біотехнологічний університет, м. Харків, Україна https://orcid.org/0009-0009-2518-9296

DOI: https://doi.org/10.31890/vttp.2025.11.05

Ключові слова: лейкоз, діагностичний антиген, РІД, серологічна діагностика, антибіотик, тіамулін, мікоплазменна деконтамінація, культур клітин

Анотація

Всесвітня організація охорони здоров’я тварин (WOAH) класифікувала ензоотичний лейкоз великої рогатої худоби (EBL) як хворобу, яка значно впливає на міжнародну торгівлю. Зоонозний потенціал BLV є відкритим питанням для науки сьогодні. Тому моніторингові серологічні дослідження на лейкоз ВРХ є вкрай важливими; в Україні для цього переважно застосовується РІД. Однією з головних проблем у галузі клітинних культур є їх інфікування мікоплазмою. Метою досліджень було вивчення впливу мікоплазменної контамінації на антигенпродукуючу здатність перещеплюваних культур клітин FLK-BLV. Для індикації мікоплазменної контамінації перещеплюваних культур клітин FLK-BLV був використаний метод ПЛР. Для деконтамінації застосовували антибіотик тіамулін в концентрації 30 μg/mL у середовищі культури, тривалість обробки 21 день. Контамінація культури клітин FLK-BLV мікоплазмою сприяла пригнічуванню проліферації клітин та зниженню утворення моношару на 30% для контамінованих культур та на 20 % для деконтамінованої культури. Звільнення від мікоплазми покращує ростові властивості культур клітин FLK-BLV. Мітотична активність за мікоплазменної контамінації знижувалась в середньому на 34,5% порівняно до первинно чистих культур. За умов деконтамінації антибіотком тіамулін мітотична активність зростала на 17,25 % у порівнянні до контамінованої культури, але водночас була нижчою на 24,25% порівняно до первинно чистих культур. Аналіз антигенпродукуючої біологічної активності субліній клітин, контамінованих мікоплазмою, деконтамінованих від мікоплазми та первинно чистих культур свідчить про підвищення антигенпродукуючих властивостей та титру антигену внаслідок деконтамінації культур клітин. Встановлено відсутність робочого титру антигену (на ++++) від контамінованої сублінії FLK-BLV-У у порівнянні до робочого титру антигену титру в нативному розчині антигену від деконтамінованої культури FLK-BLV-У та титрів від 1:0,5 до 1:1 від первинно чистих неконтамінованих культур клітин FLK-BLV-П 1, FLK-BLV-П 2.

Завантаження

##plugins.generic.usageStats.noStats##

Посилання

1. Armstrong, S. E., Mariano, J. A., & Lundin, D. J. (2010). The scope of mycoplasma contamination within the biopharmaceutical industry. Biologicals : Journal of the International Association of Biological Standardization, 38(2), 211–213. https://doi.org/10.1016/j.biologicals.2010.03.002
2. Bai, L., Yokoyama, K., Watanuki, S., Ishizaki, H., Takeshima, S. N., & Aida, Y. (2019). Development of a new recombinant p24 ELISA system for diagnosis of bovine leukemia virus in serum and milk. Archives of virology, 164(1), 201–211. https://doi.org/10.1007/s00705-018-4058-5
3. Bartlett, P. C., Ruggiero, V. J., Hutchinson, H. C., Droscha, C. J., Norby, B., Sporer, K. R. B., & Taxis, T. M. (2020). Current developments in the epidemiology and control of enzootic bovine leukosis as caused by bovine leukemia virus. Pathogens (Basel, Switzerland), 9(12), 1058. https://doi.org/10.3390/pathogens9121058
4. Buzała, E., & Dereń, W. (2003). Comparison of PLA with AGID and ELISA results in serology diagnosis of bovine leukosis. Polish journal of veterinary sciences, 6(3), 9–11. https://www.researchgate.net/publication/9081266_Comparison_of_PLA_with_AGID_and_ELISA_results_in_serology_diagnosis_of_bovine_leukosis
5. Carrillo-Ávila, J. A., de la Fuente, A., Aguilar-Quesada, R., Ligero, G., Del Río-Ortiz, J. M., & Catalina, P. (2023). Development and evaluation of a new qpcr assay for the detection of mycoplasma in cell cultures. Current issues in molecular biology, 45(8), 6903–6915. https://doi.org/10.3390/cimb45080435
6. Corral-Vázquez, C., Aguilar-Quesada, R., Catalina, P., Lucena-Aguilar, G., Ligero, G., Miranda, B., & Carrillo-Ávila, J. A. (2017). Cell lines authentication and mycoplasma detection as minimun quality control of cell lines in biobanking. Cell and tissue banking, 18(2), 271–280. https://doi.org/10.1007/s10561-017-9617-6
7. Heinecke, N., Tórtora, J., Martínez, H. A., González-Fernández, V. D., & Ramírez, H. (2017). Detection and genotyping of bovine leukemia virus in Mexican cattle. Archives of virology, 162(10), 3191–3196. https://doi.org/10.1007/s00705-017-3477-z
8. Hoermann, G., Spergser, J., Einwallner, E., Makristathis, A., Perne, A., Willinger, B., & Schwarzinger, I. (2010). Interference of Mycoplasma infection in a gene expression study: it was the environment and not the gene. Applied and environmental microbiology, 76(23), 7867–7869. https://doi.org/10.1128/aem.01265-10
9. Huang, X., Yu, M., Wang, B., Zhang, Y., Xue, J., Fu, Y., & Wang, X. (2023). Prevention, diagnosis and eradication of mycoplasma contamination in cell culture. Journal of biological methods, 10, e99010005. https://doi.org/10.14440/jbm.2023.407
10. Kuczewski, A., Orsel, K., Barkema, H. W., Kelton, D. F., Hutchins, W. A., & van der Meer, F. J. U. M. (2018). Short communication: Evaluation of 5 different ELISA for the detection of bovine leukemia virus antibodies. Journal of dairy science, 101(3), 2433–2437. https://doi.org/10.3168/jds.2017-13626
11. Lv, G., Wang, J., Lian, S., Wang, H., & Wu, R. (2024). The Global epidemiology of bovine leukemia virus: current trends and future implications. Animals : an open access journal from MDPI, 14(2), 297. https://doi.org/10.3390/ani14020297
12. Malik, P., Mukherjee, S., & Mukherjee, T. K. (2023). Microbial contamination of mammalian cell culture. In: Mukherjee, T.K., Malik, P., Mukherjee, S. (eds) Practical Approach to Mammalian Cell and Organ Culture. Springer, Singapore. https://doi.org/10.1007/978-981-19-1731-8_5-1
13. Manual of Diagnostic Tests and Vaccines for Terrestrial Animals. World Organisation for Animal Health; Paris, France: 2018. [(accessed on 11 August 2020)]. Enzootic bovine leukosis; pp. 1113–1124. Available online: https://www.oie.int/standard-setting/terrestrial-manual/access-online/
14. Miller, C. J., Kassem, H. S., Pepper, S. D., Hey, Y., Ward, T. H., & Margison, G. P. (2003). Mycoplasma infection significantly alters microarray gene expression profiles. BioTechniques, 35(4), 812–814. https://doi.org/10.2144/03354mt02
15. Nikfarjam, L., & Farzaneh, P. (2012). Prevention and detection of Mycoplasma contamination in cell culture. Cell journal, 13(4), 203–212. PMID: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/23508237/
16. Nir-Paz, R., Prévost, M. C., Nicolas, P., Blanchard, A., & Wróblewski, H. (2002). Susceptibilities of Mycoplasma fermentans and Mycoplasma hyorhinis to membrane-active peptides and enrofloxacin in human tissue cell cultures. Antimicrobial agents and chemotherapy, 46(5), 1218–1225. https://doi.org/10.1128/AAC.46.5.1218-1225.2002
17. Soheily, Z., Soleimani, M., & Majidzadeh-Ardebili, K. (2019). Detection of mycoplasma contamination of cell culture by a loop-mediated isothermal amplification method. Cell journal, 21(1), 43–48. https://doi.org/10.22074/cellj.2019.5624.
18. Uphoff, C. C., & Drexler, H. G. (2014). Detection of Mycoplasma contamination in cell cultures. Current protocols in molecular biology, 106, 28.4.1–28.4.14. https://doi.org/10.1002/0471142727.mb2804s106
19. Uphoff, C. C., Denkmann, S. A., & Drexler, H. G. (2012). Treatment of mycoplasma contamination in cell cultures with Plasmocin. Journal of biomedicine & biotechnology, 267678. https://doi.org/10.1155/2012/267678
20. Young, L., Sung, J., Stacey, G., & Masters, J. R. (2010). Detection of Mycoplasma in cell cultures. Nature protocols, 5(5), 929–934. https://doi.org/10.1038/nprot.2010.43